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Y

POWERPLEX
®
Sistema Identificador      
 

 

El análisis de ADN usando los short tandem repeats (STRs) se ha convertido en la tecnología líder en la identificación humana desde hace algunos años. Recientemente, muchos laboratorios han descubierto la aplicación del estudio de los STRs en el cromosoma Y (Y-STRs) para la identificación de evidencias provenientes de varones. Estos marcadores se encuentran únicamente en hombres y se heredan a través de la línea paterna. Los marcadores Y-STR pueden ser útiles en la interpretación de mezclas de fluidos masculino/femenino, debido a que la porción femenina no contribuye con el perfil amplificado. Los marcadores Y-STR son útiles también para análisis de paternidad y estudios antropológicos.

  
                   

Amplificación de 12 loci Y-STR en una sola reacción.
El sistema PowerPlex Y (Cat.# DC6760/ DC6761) permite la coamplificación y la detección de tres colores de doce loci en una sola amplificación (Figura 1, Páneles A y B). Un sistema con una única amplificación aumenta la eficiencia y la eficacia del laboratorio reduciendo dramáticamente las necesidades de almacenamiento, el manejo de la muestra, consumo de reactivos, tiempo de preparación del cóctel de reacción, tiempo de análisis y uso del equipo. Los loci incluidos en el sistema son DYS19, DYS385a/b, DYS389I/II, DYS390, DYS391, DYS392, DYS393, DYS437, DYS438 y DYS439. La determinación de los tamaños de los fragmentos amplificados se hace posible con el Internal Lane Standard 600 (Cat.# DG2661).
El sistema PowerPlex Y incluye los nueve loci definidos por la European minimal haplotype* (www.ystr.org), avalado por la ISFG (International Society of Forensic Genetics), más los dos loci adicionados a este panel por la SWGDAM (Scientific Working Group on DNA Analysis Methods).**
*European minimal haplotype loci: DYS19, DYS385a/b, DYS389I/II, DYS390, DYS391, DYS392, y DYS393.
**Los loci avalados por la SWGDAM son: DYS19, DYS385a/b, DYS389I/II, DYS390, DYS391, DYS392, DYS393, DYS438 and DYS439.
Este sistema ha sido optimizado para la detección en los secuenciadores ABI PRISM® 310 y 3100 Genetic Analyzers, además en el ABI PRISM® 377 DNA Sequencer. La interpretación de las marcas fluorescentes se lleva a cabo utilizando la matriz disponible en Promega (Cat.# DG2860 or DG3380).
 
CARACTERÍSTICAS      
Máxima especificidad, lo que significa que amplifica sólo ADN de varón: Cada lote se encuentra probado para asegurar la no amplificación de ADN femenino con más de 100ng (Figura 1, Panel C). Los estudios adicionales muestran que no hay amplificación con >100ng de ADN femenino. Los estudios realizados en Promega (Figura 1, Panel D) muestran resultados interpretables a partir de ADN proveniente de varón teniendo >100-veces un exceso de ADN femenino. Esto hace que el sistema PowerPlex® Y sea una excelente opción para el análisis de muestras con mezclas muy “cargadas“.
figura 1. Sistema de amplificación PowerPlex Y. Las amplificaciones fueron realizadas con una gran cantidad de ADN molde y corridas en el ABI PRISM® 310 Genetic Analyzer usando un tiempo de inyección de 2 segundos. Para ver y analizar las muestras se utilizó el software GeneScan®.
 
  • Panel A. Resultados de la amplificación con 1ng de ADN molde de varón.
  • Panel B. Resultados de la amplificación con 0.125ng de ADN molde de varón
  • Panel C. Resultados de la amplificación con 100 ng de ADN molde de mujer
  • Panel D. Resultados de la amplificación con 1000 veces un exceso de ADN femenino (100ng) con relación al ADN masculino(0.1ng).
 
Tipificación de las muestras con gran confiabilidad
  • Productos de PCR cortos: Los productos de amplificación son menores a 335 bases, lo que incrementa la probabilidad de obtener un perfil completo de muestras muy degradadas.
  • Mezcla de marcadores alélicos de peso molecular (Allelic Ladder): Incluye una gran cantidad de alelos que permite tipificar los más raros (Figura 2).
  • No existe sobrelapamiento de locus: Los primers han sido diseñados de manera que cada alelo corresponda a un locus en particular sin sobrelaparse con los alelos del locus vecino, reduciendo con esto la posibilidad de interpretaciones erróneas.
  • Máxima sensibilidad con calidad de ADN molde limitada: El sistema PowerPlex® Y se encuentra optimizado para usar de 0.5 a 1ng ADN molde. Sin embargo, cada lote ha sido diseñado para dar resultados reproducibles con 0.25ng ADN. Los estudios adicionales muestran resultados interpretables con <0.25ng de ADN (Figura 1, Panel B)
  • Macro PowerTyper™ Y: El macro PowerTyper™2.0, ha sido diseñado para que automáticamente etiquete los fragmentos de los datos que resultan del GeneScan®. El Macros PowerTyper™ puede ser bajado de Genetic Identity Downloads o requerido en CD-ROM (Cat.# DG3470).
   
Figura 2. La mezcla PowerPlex Y Allelic Ladder. La mezcla PowerPlex Y Allelic Ladder fue detectada usando un ABI PRISM® 310 Genetic Analyzer con un tiempo de inyección de 3-segundos. El archivo generado en el GeneScan® fue analizado con el software Genotyper® y el macro PowerTyper™ Y .
 
  • Panel A. Componentes del marcador alélico de peso molecular y sus designaciones alélicas, con fluoresceína como marca fluorescente.
  • Panel B. Componentes del marcador alélico de peso molecular y sus designaciones alélicas, con JOE como marca fluorescente.
  • Panel C. Componentes del marcador alélico de peso molecular y sus designaciones alélicas, con TMR como marca fluorescente.
 
LISTA DE LOS COMPONENTES DEL SISTEMA
  • Gold STR 10X Buffer
  • PowerPlex® Y 10X Primer Pair Mix
  • 9948 ADN de varón
  • 9947A ADN
  • Internal Lane Standard 600
  • Blue Dextran Loading Solution
  • PowerPlex® Y Allelic Ladder Mix (marcador alélico de peso molecular)
 
 
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